菌落總數測定中的注意事項

1、在GB 4789.2的培養(yǎng)條件下所得結果，只包括一群在平板計數瓊脂上生長發(fā)育的嗜中溫需氧菌或兼性厭氧菌的菌落總數。

2、根據食品衛(wèi)生標準要求和對樣品污染情況的估計，選擇2~3個稀釋度。加入樣品時要注意外來的污染。

3、為防止細菌增殖及產生片狀菌落，在加入樣液后，應在15min內傾注培養(yǎng)基。檢樣與培養(yǎng)基混勻時，可先向一個方向旋轉，然后再向相反方向旋轉。旋轉中應防止混合物濺到皿邊的上方。

4、培養(yǎng)基傾注的溫度與厚度是實驗正確與否的關鍵。（傾注的溫度：一般水浴和傾注溫度在46±1℃，溫度過高會造成已受損傷的菌細胞死亡，過低會導致瓊脂發(fā)生輕微凝固。厚度：直徑9cm的平皿一般要求15~20mL培養(yǎng)基，若培養(yǎng)基太薄，在培養(yǎng)過程中可能因水分蒸發(fā)而影響細菌的生長）。培養(yǎng)基凝固后，應在盡快將平皿翻轉培養(yǎng)，保持瓊脂表面干燥，盡量避免菌落蔓延生長，影響計數。

5、檢驗過程中還應該用稀釋液做空白對照，用以判定稀釋液、培養(yǎng)基、平皿或吸管可能存在的污染。同時，檢驗過程中應在工作臺上打開一塊空白的平板計數瓊脂，其暴露時間應與檢驗時間相當，以了解檢樣在檢驗過程中有無受到來自空氣的污染。

6、每種不同樣品中的細菌都有一定的生理特性，培養(yǎng)時應用不同的營養(yǎng)條件及生理條件可能得出不同的結果，因而應根據檢測標準的要求選擇適當的培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時間。

食品：36±１℃，48±2h 。

飲用水：36±１℃，48±2h 。

水產品（指原生態(tài)、未加工的水產品）：30±１℃，72±3h。(36℃培養(yǎng)和30℃培養(yǎng)結果差別較大，同樣水產品48h結果和72h也有差別。

7、有時檢樣的稀釋液中往往帶有食品顆粒（如奶粉、堅果），在這種情況下，為避免與細菌菌落混淆，可作一檢樣對照將稀釋液與PCA混合，不經培養(yǎng)，置4℃環(huán)境放置，在計數時用于對照。

另外也可以在已熔化而保溫在46±1℃水浴內的平板計數瓊脂中，按100ml加1ml 0.5%氯化三苯四氮唑（TTC）水溶液，培養(yǎng)后食品顆粒不變色，細菌為紅色。

菌落計數注意事項

1、如果高稀釋度平板上的菌落數比低稀釋度平板上的菌落數高，則說明檢驗過程中可能出現(xiàn)差錯或樣品中含抑菌物質，這樣的結果不可用于結果報告。

2、如果平板上出現(xiàn)鏈狀菌落，菌落間沒有明顯的界限，這可能是瓊脂與檢樣混勻時，一個細菌塊被分散所造成的。一條鏈作為一個菌落計。若培養(yǎng)過程中遭遇昆蟲侵入，在昆蟲爬行過的地方也會出現(xiàn)鏈狀菌落，也不應分開計數。

3、如果平板上菌落太多，不能計數時，不建議采用多不可計作報告。可以在最高稀釋度平板上任意選取2個1cm²的面積，計算菌落數，除2求出每cm²面積內平均菌落數，乘以63.6(皿底面積cm²數)。

4、如果檢樣是微生物類制劑（酸牛奶、酵母制酸性飲料等），在進行菌落計數時應將有關微生物（乳酸菌、酵母菌）排除，不可并入檢樣的菌落總數內作報告。 每個樣品從開始稀釋到傾注最后一個平板的時間不得超過15min,目的是為了使菌落能在平板上均勻分布，否則，時間放長了，樣液可能由于干燥而貼在平板上，傾注瓊脂后不易搖開，容易產生片狀菌落，影響菌落計數。另外，瓊脂凝固后不要在室溫長時間放置，應及時將平皿倒置培養(yǎng)，可避免菌落的蔓延生長。

結果計算注意事項

1、若只有一個稀釋度平板上的菌落數在適宜計數范圍內,計算兩個平板菌落數的平均值,再將平均值乘以相應稀釋倍數,作為每g(mL)樣品中菌落總數結果。

2、若有兩個連續(xù)稀釋度的平板菌落數在適宜技術范圍內時，按式（1）計算

N = ∑C/(n1 +0.1n2)d ……………………(1)式中:

N ———樣品中菌落數;

∑C———平板(含適宜范圍菌落數的平板)菌落數之和;

n1 ———稀釋度(低稀釋倍數)平板個數;

n2 ———第二稀釋度(高稀釋倍數)平板個數;

d ———稀釋因子(稀釋度)。

N = ∑C/(n1 +0.1n2)d = (232+244+33+35)/[2+ (0.1×2)]×10-2 = 544/0.022=24727

表示為25000或2.5×104。

3、若所有稀釋度的平板上菌落數均大于300CFU,則對稀釋度最高的平板進行計數,其他平板可記錄為多不可計,結果按平均菌落數乘以最高稀釋倍數計算。

4、若所有稀釋度的平板菌落數均小于30CFU,則應按稀釋度低的平均菌落數乘以稀釋倍數計算。

5、若所有稀釋度(包括液體樣品原液)平板均無菌落生長,則以小于1乘以低稀釋倍數計算。

6、若所有稀釋度的平板菌落數均不在30CFU~300CFU 之間,其中一部分小于30CFU 或大于300CFU 時,則以接近30CFU 或300CFU 的平均菌落數乘以稀釋倍數計算。

菌落總數的報告

1、菌落數小于100CFU 時,按“四舍五入"原則修約,以整數報告。

2、菌落數大于或等于100CFU 時,第3位數字采用“四舍五入"原則修約后,取前2位數字,后面用0代替位數;也可用10的指數形式來表示,按“四舍五入"原則修約后,采用兩位有效數字。

3、若所有平板上為蔓延菌落而無法計數,則報告菌落蔓延。

4、若空白對照上有菌落生長,則此次檢測結果無效。

5、稱重取樣以CFU/g為單位報告,體積取樣以CFU/mL為單位報告。